中药活性成分是其发挥临床疗效的物质基础。近年来，国内外研究人员以亲和色谱或亲和质谱为核心，构建了系列在线活性筛选平台，从中药中获取了大量的活性成分。然而，这些筛选体系通常以化学成分响应值的降低或者探针底物响应值的升高为标准判定活性配体。由于未能实现配体-蛋白质复合物的直接检测，并且难以评估配体与蛋白质的结合强度，筛选出来的化合物往往是活性较低的常量成分。此外，各类非特异性结合还导致了大量假阳性结果的发生。为了克服传统方法的缺点，美高梅集团中药现代研究中心屠鹏飞/宋月林研究团队在前期创建在线能量分辨质谱（Anal Chem, 2019, 91, 15040; Anal Chim Acta, 2017, 953, 40）、肽图分析（RSC Adv, 2022, 12, 9868）以及“代谢组-蛋白组”双组学同步分析方法（Anal Chim Acta, 2019, 1069, 89）的基础上，建立了柱后注射-液相色谱–能量分辨亲和质谱系统（PCI-LC–ER-AMS），同步检测（1）潜在配体响应值是否降低；（2）蛋白质响应值是否降低；（3）配体-蛋白质复合物相关离子是否出现；（4）配体-蛋白质结合能力强弱。通过“四合一”测定，实现中药中活性成分的高效、准确筛选。该研究以细胞色素C（Cyt C）为示范，采用PCI-LC–ER-AMS从中药中“钩钓”活性配体，并成功应用于常用中药黄芩中Cyt C配体的在线筛选，从黄芩中捕获24个潜在活性成分。进一步利用分子对接、表面等离子共振（SPR）、紫外-可见光谱（UV-Vis）以及细胞活性验证等手段对潜在活性进行验证，结果表明筛选捕获的化合物均能与Cyt C结合，并且结合能力与相应的OCE值呈现正相关关系。 

该团队建立的具有“四合一”检测性能的PCI-LC–ER-AMS平台，实现了中药中Cyt C配体的快速、准确筛选，为中药中活性先导化合物的高效发现提供了有力工具。相关研究结果以Online ligand screening for cytochrome C from herbal medicines through “four-in-one” measurement为题发表在中科院一区Top期刊Pharmacological Research（http://doi.org/10.1016/j.phrs.2024.107406）。相关方法已申请发明专利（申请号：2024113073930）

中药学院博士研究生李婷和张珂为论文共同第一作者，屠鹏飞教授和宋月林研究员为共同通讯作者。该项研究得到了国家自然科学基金（82474202和82030114）、中央高校基本科研基金费（2024-JYB-JBZD-052）以及国家中医药管理局高水平中医药重点学科建设项目—中药分析学科的资助。